Flash紫外聚焦检测技术-解决信号弱样品的检测收集问题


图1. 硬脂酸甲酯结构。

图2. 在Isolera系统上显示的硬脂酸甲酯的紫外光谱。完全饱和分子的羰基对紫外线的吸收很差,波长在205纳米左右。

图3. 胆固醇结构。

图4. Isolera系统显示:胆固醇的紫外光谱在200纳米处有一个紫外值,但吸收很少。纯化方法比较简单,在100%甲醇中,使用12克Biotage SNAP Ultra C18 色谱柱,流速25ml/min。为了便于检测,我选择了200nm和205nm两种单独的波长,以及Biotage Isolera Spektra Flash系统提供的全波长功能。全波长功能使Isolera能够使用所有的二极管来检测在所有选定波长上吸收的任何紫外线能量。该系统的波长范围是200nm到400nm,这个范围内的任何紫外线吸收实际上是叠加的,总吸收量除以所选波长的数量(有助于保持非常强的吸收量比例)。对于这些吸收少的化合物,由于总的吸收是200个波长的平均值,因此利用整个200-400nm的波长范围是无效的。但话说回来,使用200nm和205nm的单一波长也是无效的(图5所示)。在200nm处,未检测到硬脂酸甲酯,因此也未收集。检测到胆固醇,但其信号强度低于200 mAU,这意味着将浪费掉大量的化合物。

图5. 硬脂酸甲酯(峰值约为4CV)和胆固醇(峰值约为8CV)混合物的Flash纯化,检测设置为200nm(红色)、205nm(黑色)和全波长(200-400nm,棕褐色)。绿色的峰值是DCM——样品的溶解溶剂。尽管这些化合物的紫外光波长为200nm,但几乎检测不到硬脂酸甲酯,因此没有收集。相反的,根据被提纯的化合物的波长范围来定制检测波长是有意义的。在这种情况下,这两种化合物在一个狭窄的波段(200至220nm)吸收紫外线,但在200至210nm之间的吸收强。为了显示波长聚焦的有效性,我重复了纯化过程。但为了加强检测,我将所有波长范围设定为200-210nm,如图6所示。

图6. 波长聚焦对硬脂酸甲酯和胆固醇的检测灵敏度的影响。将200nm(红色)和205nm(黑色)的特定波长以及200-210nm(棕褐色)之间的聚焦范围用于检测。设定特定的聚焦范围为紫外吸收差的样品提供了更好的灵敏度,允许检测和收集更多的各种化合物。如您所见,使用波长聚焦大大改善了化合物检测。在以前没有收集到硬脂酸甲酯的地方,即使在单一波长下,使用200-210nm的聚焦波长范围也可以检测和收集更多的化合物。胆固醇的紫外线吸光度也增加了——大约比单一波长(200nm)增加了5至6倍。这种波长聚焦技术的好处是可以收集更多的化合物,减少浪费。如果考虑到这一点,你会意识到这是一种很好的技术,不仅可以检测这些脂肪化合物,还可以检测多肽和其他几乎紫外信号弱的各种样品。/文:Biotage
-
Biotage微波反应瓶:高精度反应瓶
微波反应瓶:高精度反应瓶反应瓶耐用、安全。高精度的微波反应瓶经过严格的设计和耐压测试。在广泛的条件下,更够承受超过30bar的压力。 操作简单(现代微波化学合成仪的优点之一):反应在压盖密封的反应瓶中进……
-
美国Boekel原位杂交仪Slide Moat
美国Boekel原位杂交仪Slide Moat 特点: 利用PID温度控制器可以快速升温 无需等待塑料或者纸巾提供温度,加快杂交时间 加热单元有密封垫的加热玻璃盖 相对于热循环做载玻片的仪器, 该杂交仪更廉价 参数: 外形尺……
-
Fluxdata FD-D8R SCI/SCE颜色检测系统
FluxData FD-D8R是一种坚固、非接触、实时分光光度计,设计用于工业应用。它新颖,紧凑的设计允许测量颜色,包括和排除镜面反射组件使用漫射照明和8°测量角度,无需连接到光纤。 该系统根据标准快速测量颜色,结果……
-
Interscience FlexiPump Scale液体分装称重蠕动泵
FlexiPump Scale是一款液体分装泵,结合了蠕动泵的强大功能与集成称重平台的高精度。能够满足严格的实验室要求。FlexiPump Scale是一个适用于各种应用的完整解决方案。 分装模式:连续分装 - 单次分装 - 多次分装……
-
Diagenode Bioruptor Pico非接触超声波打断仪
Diagenode公司开发的水槽式超声破碎仪(Bioruptor®系列制备150bp - 2KB)和一个独特的流体剪切仪(megaruptor®制备2KB的- 75kb)基本涵盖了目前的应用范畴。 Bioruptor Pico描述: 1.专为二代测序DNA 样本与表……
-
SinapTec Lab120 Axial实验室超声波破碎仪
法国SinapTec起源于研究实验室,现已发展成为一家独立的中小企业,在超声技术的开发和实施方面拥有超过35年的经验。35年的创新成果将超声波广泛应用于制造业,医疗保健和环境敏感领域(温度,压力,爆炸性环境或辐……
-
MINITECH Mini-Mill/2 高精度数控铣床
Minitech CNC Mini Mill/2 是最近重新设计和改进的。提供经济实惠和高质量性能的数控铣床小部件制造。 从头开始,考虑到精度,我们的Mini-Mill/2在每个阶段都具有线性轴承和精密滚珠螺杆,确保了优异效果。……
-
Organomation N-EVAP 12位氮吹仪
【产品型号】:N-EVAP 12位 【产品特点】: 针采用不锈钢材质。 仪器尺寸紧凑,占用空间少。 样品表面使用氮气或空气来吹扫。 具有恒温控制,水浴提供温和加热。 氮气消耗量低,330ml / min / 样品。 带针阀的气……
-
超声联合微泡技术在肿瘤治疗中的研究进展
李美莺 章丽洁 陈燕君 沈俭 戴莉 ( 上海中医药大学附属普陀医院,上海 200062) 摘 要 随着超声分子成像技术的飞速发展,超声联合微泡(空化效应联合微泡)成为生物医学的研究热点,应用前景广阔,有望成为一种新的……
